而最後一步,則是在內裡找到陳述基因。
熒光素酶是能夠催化分歧底物氧化發光的一類酶。哺乳細胞無內源性熒光素酶。最常用的熒光素酶有細菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和renilla熒光素酶。細菌熒光素酶對熱敏感,是以在哺乳細胞的利用中遭到限定。螢火蟲熒光素酶活絡度高。檢測線性範圍寬達7~8個數量級,是最常用於哺乳細胞的報導基因。用熒光比色計便可檢測酶活性,因此合用於高通量遴選。跟著具有膜通透性和光裂解感化的螢火蟲熒光素酶的利用,無需裂解細胞便可檢測酶活性。renilla熒光素酶催化腸腔素氧化,產品可透過生物膜,能夠是最合用於活細胞的陳述分子。將熒光素酶陳述基因載體轉染到細胞中,可用熒光素酶檢測體係活絡便利地測定熒光素酶基因的表達。自1986年起,螢火蟲熒光素酶基因被用作測定基因表達的陳述基因,獲得了遍及的利用ga公司的pgl3及pgl2係列載體,含sv40啟動子及加強子的分歧組合,有助於闡發dna片段的轉錄活性。
李安對勁地看著本身的身材,然掉隊入了這個軀體當中!(未完待續)。
“仆人,勝利了!”
氯黴素乙酰基轉移酶(cat):該陳述基因來源於大腸桿菌轉位子9,是第1個用於檢測細胞內轉錄活性的陳述基因。氯黴素乙酰基轉移酶可催化乙酰coa的乙酰基轉移到氯黴素3羥基,而使氯黴素解毒。cat在哺乳細胞無內源性表達,性子穩定,半衰期較短,適於瞬時表達研討。可用同位素、熒光素和酶聯免疫吸附測定檢測其活性。也可停止蛋白質印跡)和免疫構造化學闡發。cat與其他陳述基因比擬,線性範圍較窄,活絡性較低。