連接反應需重視載體dna與dna片段的比率。以λ或cos質粒為載體時，構成線性多連體dna分子，載體與dna片段的比率高些為佳。以質粒為載體時，構成環狀分子，比率常為1∶1。

cdna克隆是以mrna為原質料，經體外反轉錄分解互補的dna(cdna)，再與載體dna分子連接引入寄主細胞。每一cdna反應一種a克隆的漫衍也反應了mrna的漫衍。特性是:

操縱分子克隆技術已將胰島素，人、牛和雞的發展激素、人的滋擾素、敗壞素、促紅細胞發展激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因製成工程菌，操縱發酵產業停止了大範圍出產。還可進步微生物本身所產生的蛋白酶類和抗生素類藥物的產量。

到了三級文明，有關克隆，已經研討到了分子程度，也就是分子克隆！

在原核細胞中，凡是是幾種分歧的mrna連在一起，相互之間由一段短的不編碼蛋白質的間隔序列所隔開，這類mrna叫做多順反子mrna。順反子的觀點來自遺傳學中的順反重組實驗，是肯定互換片段究竟在一個基因內還是屬於兩個基因的實驗。簡言之，一個順反子就是一個基因。多順反子就是多個基因。真核生物中也有多順反子，比如c.elegans共有13500個基因，約25%的是多順反子。

甚麼是分子克隆呢？

將dna片段(或基因)與載體dna分子共價連接，然後引入寄主細胞，再遴選獲得重組的克隆，按克隆的目標可分為dna和cdna克隆兩類。

那麼。如何做到這一點呢？

最後是引入寄主細胞。

dna分子與載體分子連接是克隆過程中的首要環節之一，體例有:1粘性末端連接，dna片段兩端的互補堿基挨次稱之為粘性末端，用同一種限定性內切酶消化dna可產生不異的粘性末端。在連接酶的感化下可規複原樣，有些限定性內切酶固然辨認分歧挨次，卻能產生不異末端。2平頭末端連接，用物理體例製備的dna常常是平頭末端，有些酶也可產平生頭末端。平頭dna片段可在某些dna連接酶感化下連接起來，但連接效力不如粘性末端高;3同聚寡核苷酸末端連接。4野生討論分子連接，在平頭dna片段末端加上一段野生分解的、具有某一限定性內切酶辨認位點的寡核苷酸片段，經限定性內切酶感化後就會產生粘性末端。