起首是dna片段的製備！

dna分子與載體分子連接是克隆過程中的首要環節之一，體例有:1粘性末端連接，dna片段兩端的互補堿基挨次稱之為粘性末端，用同一種限定性內切酶消化dna可產生不異的粘性末端。在連接酶的感化下可規複原樣，有些限定性內切酶固然辨認分歧挨次，卻能產生不異末端。2平頭末端連接，用物理體例製備的dna常常是平頭末端，有些酶也可產平生頭末端。平頭dna片段可在某些dna連接酶感化下連接起來，但連接效力不如粘性末端高;3同聚寡核苷酸末端連接。4野生討論分子連接，在平頭dna片段末端加上一段野生分解的、具有某一限定性內切酶辨認位點的寡核苷酸片段，經限定性內切酶感化後就會產生粘性末端。

m13噬菌體是一種奇特的載係十足，它隻能侵襲具有f基因的大腸桿菌，但不裂解寄主菌。m13dna(rf)在寄主菌內是雙鏈環狀分子，象質粒一樣自主複製。製備體例同質粒。寄主菌可分泌含單鏈dna的m13噬菌體，又能便利地製備單鏈dna。用於dna挨次闡發、定點突變和核酸雜交。

將dna片段(或基因)與載體dna分子共價連接，然後引入寄主細胞，再遴選獲得重組的克隆，按克隆的目標可分為dna和cdna克隆兩類。

質粒是細菌染色體外遺傳因子，dna呈環狀，大小為1-200千堿基對(kb)。在細胞中以遊離超螺旋狀存在，很輕易製備。質粒dna可通過轉化引入寄主菌。在細胞中有兩種狀況。一是‘緊密型‘;二是‘敗壞型‘。彆的還應具有分子量小，易轉化，有一最多個挑選標記的特性。質粒型載體普通隻能照顧10kb以下的dna片段。合用於構建原核生物基因文庫，cdna庫和次級克隆。

連接反應需重視載體dna與dna片段的比率。以λ或cos質粒為載體時，構成線性多連體dna分子，載體與dna片段的比率高些為佳。以質粒為載體時，構成環狀分子，比率常為1∶1。

接著是dna載體的連接。

那麼。如何做到這一點呢？

最後是引入寄主細胞。

通過遺傳工程看到癌細胞具有逆轉為普通細胞的能夠性，比方sv40病毒引發的小鼠腫瘤細胞。在溫度高時可逆轉為普通細胞。為醫治半乳糖血癥，用帶有大腸桿菌乳糖把持子的λ噬菌體去傳染半乳糖血癥患者的離體培養細胞，發明這類細胞的半乳糖苷酶達到了普通程度。並確切能代謝半乳糖。